В настоящее время клиническая диагностика гриппа в период вспышек ОРВИ весьма затруднительна, так как на долю гриппа в этот период приходится не более 25 %.

Лабораторная диагностика обеспечивает наиболее точную расшифровку этиологии гриппа и других ОРВИ. Успешные результаты лабораторной диагностики зависят от правильного сбора материала, доставки в лабораторию и предварительной обработки образцов. Подтвержденным случаем инфекции, вызванной вирусом гриппа, считается случай, при котором у человека имеет место острое фебрильное респираторное заболевание и положительные результаты лабораторной диагностики (одного или нескольких методов).

Используются следующие лабораторные методы исследования:

* выявление возбудителя гриппа в нативном материале от больных с использованием различных иммунохимических и молекулярно-биологических методов (иммуноферментный (ИФА) и иммунофлюоресцентный (ИФМ) для выявления антигена возбудителя, полимеразная цепная реакция для выявления РНК вируса гриппа (ОТ-ПЦР или RT-ПЦР));

* выделение возбудителя гриппа от больных (в развивающихся куриных эмбрионах, в культуре клеток MDCK) с последующей идентификацией его в обогащенном материале (ОТ-ПЦР, ИФА, ИФМ);

* ретроспективные серологические реакции (реакции связывания комплемента (РСК) и торможения гемагглютинации (РТГА)) для выявления нарастания титра специфических антител в сыворотках больного, полученных в первые сутки заболевания и в период реконвалесценции.

Для лабораторной диагностики гриппа материалом служат мазки (мазки-отпечатки) из нижнего носового хода, носоглоточные смывы, нативное отделяемое носоглотки и кровь.

Носоглоточные мазки (смывы) отбирают в первые несколько суток болезни (не позднее 2-3 дня). При этом ИФА, ИФМ и ОТ-ПЦР (RT-ПЦР) позволяют в течение 3-5 часов поставить диагноз.

Кровь для серологического исследования берут из вены или из пальца не менее двух раз: как правило, в первые 2-3 суток заболевания и через 3-4 недели от начала болезни. Серологические исследования помогают ретроспективной диагностике гриппа.

Диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более в реакциях связывания компонента (РСК) с гриппозными антигенами и торможения гемагглютинина (РТГА).

Для выделения возбудителя гриппа материалом, взятым об больных, инфицируют развивающиеся куриные эмбрионы и постоянную культуру клеток почки собаки MDCK. После первичного заражения проводят 1-3 обогатительных пассажа, а затем проводят идентификацию выделенного возбудителя. Результативность методов выделения варьирует в широких пределах (от 0 до 50 %) и зависит от периода развития вспышки, типа (подтипа) возбудителя и правильности выбора объекта заражения.

В современных условиях наиболее практичным методом выявления возбудителя гриппа является полимеразная цепная реакция.

Она объединяет все основные положительные качества других методик – быстроту исследования, малый объем клинического материала, возможность его длительного хранения, не только качественный (метод обратной транскрипции – полимеразной цепной реакции), но и количественный анализ (метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени), высокую чувствительность и специфичность.

Более подробно порядок забора, транспортирования, хранения клинического материала для ПЦР-диагностики отражен в методических рекомендациях ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (М., 2008).